doi：10.6048/j.issn.1001-4330.2024.05.025
摘" 要：【目的】研究妊娠后期母马血液常规生化指标的变化，为妊娠母马的健康养殖和科学饲养提供参考依据。
【方法】选择平均年龄（7.50±1.50）岁、胎次相近（3～4）胎、膘情、健康状况一致的伊犁马18匹，哈萨克马21匹，纯血马21匹，杂交马（伊犁马♀×奥尔洛夫马♂）19匹。以品种为单位，分为4个试验组，在相同日粮营养水平和管理条件下，饲养试验90 d。试验期结束当天，早晨空腹颈部静脉采集孕马血液并测定相关指标。
【结果】（1）纯血马血浆中总蛋白、甘油三酯和低密度脂蛋白分别高于其他三个品种58.39%（P＜0.05）、44.01%（P＜0.01）和32.16%（P＜0.01）。（2）其中伊犁马、哈萨克马和纯血马血浆总胆红素极显著高于杂交马（P＜0.01），分别提高了84.51%、131.35%和93.17%，伊犁马和哈萨克马直接胆红素分别高于杂交马82.50%和89.83%（P＜0.05）。（3）伊犁马和纯血马葡萄糖水平分别高于哈萨克马106.93%和148.18%（P＜0.01）。
【结论】在相同营养水平和饲养管理条件下，因其品种差异，纯血马妊娠期与其他品种的蛋白质、肝功能酶活力及血糖水平都较为优异。而杂交马在妊娠期间肝功能代谢及血糖水平方面相较于其他3个品种马较低。
关键词：马；妊娠期；生化指标；营养水平
中图分类号：S821""" 文献标志码：A""" 文章编号：1001-4330（2024）05-1268-09
收稿日期（Received）：
2023-10-09
基金项目：
新疆维吾尔自治区重大科技专项项目（2022A02013-2-3）
作者简介：
杨帆（1999-），男，陕西干县人，硕士研究生，研究方向动物营养与饲料科学，（E-mail）1540254673@qq.com
通讯作者：
陈开旭（1983-），男，四川三台人，博士，硕士生导师，研究方向为动物营养，（E-mail）119889175@qq.com
0" 引 言
【研究意义】妊娠过程中母体的激素、免疫机能以及机体营养生理的代谢程度等均发生特异性改变，相对于非妊娠母体是一种病理的过程［1-2］。体重的增加，伴随着血糖、胰岛素及胆固醇等血液生理生化指标浓度、水平的升高或降低［3-4］。血液指标的变化，一方面是妊娠机体正常生理反应，另一方面妊娠期母畜对不同饲养环境、健康状况以及日粮营养水平等均产生影响［5-6］。妊娠期随着胎儿的生长，对营养物质的需要量不断增加，母体获取营养物质的量也增加［7］。因此，充足的营养物质摄入及获取是胎儿正常发育和母畜健康的保证。冷静等［8］研究表明，妊娠母羊的血液各项指标的变化说明饲喂期间营养水平的优劣，而在妊娠期内必须保证妊娠母羊有足够的营养来源，才能符合其妊娠需要。【前人研究进展】李晓斌等［9］研究结果显示，给妊娠期哈萨克马日粮中添加硫酸钠、微量元素及其组合可显著或极显著提高孕马雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠、17α-双氢马烯雌酮硫酸钠含量，对母马的孕期健康有显著的调控作用。刘保宣等［10］研究结果显示，均衡伊犁马孕后期氨基酸的平衡，可改变血浆总一氧化氮合成酶（TNOS）活力，一氧化氮（NO）和氨（NH3）的浓度，从而改善母马妊娠期的营养状况。臧长江等［11］研究发现补喂微生物制剂可提高泌乳期母马血液中总蛋白及白蛋白含量，满足泌乳及孕期母马对营养物质的需要。【前人研究进展】目前，关于妊娠期马血浆生化指标的相关研究主要集中于通过日粮中补喂或添加营养性添加剂等方式调控，而从日粮组成及营养水平比较品种间差异的研究较少，需进一步探究妊娠期马匹对日粮营养物质转运、代谢等情况。【拟解决的关键问题】在相同的日粮组成及营养水平条件下，以4个不同品种的妊娠期母马为研究对象，通过饲养试验，测定其血浆中蛋白代谢、脂代谢及血糖水平等相关指标，比较不同品种妊娠期马匹生理水平及器官功能状况以及对营养物质的需求，为不同品种妊娠期马匹科学饲养管理和日粮搭配等提供参考。
1" 材料与方法
1.1" 材 料
试验在新疆昭苏县喀拉苏镇伊犁马研究繁育中心实施。昭苏县平均海拔1 892 m，冬长夏短，年均温度3.95℃。
试验分别选择平均年龄（7.50±1.50）岁、妊娠周期相近（后期，妊娠第8～10个月）、胎次相近（3～4）胎、膘情、兽医检测正常、健康状况一致的伊犁马18匹平均体重（411±29） kg，哈萨克马21匹平均体重（382±33） kg，纯血马21匹平均体重（487±36） kg，杂交马伊犁马 ♀×奥尔洛夫马 ♂平均体重（428±32）kg的19匹作为研究对象。其中伊犁马、哈萨克马及杂交马祖代有一定的血缘关系。
1.2" 方 法
1.2.1" 试验设计
将4个品种79匹马，以品种为单位，分为4组，分别为伊犁马组、哈萨克马组、纯血马组和杂交马组。在饲养管理和日粮组成及营养水平相同的条件下，进行为期90 d的饲养试验。在试验结束的当天，早晨空腹颈部静脉采集血液、制取血浆，并测定血浆中影响妊娠健康的相关指标。
1.2.2" 饲养管理
所有试验马匹为半舍饲的管理模式，夜间舍饲饲养，白天于室外活动场饲养。精料补充料每匹马3.00 kg/d，平均分3等份，粗饲料以苜蓿干草和牧草为主（重量比为1∶1），每天投喂3次，每次4 kg。将精料补充料和粗饲料分别于每天09：00、14：00及19：00补喂。日粮精粗比为80∶20。表1，表2
1.2.3" 样品采集
于试验结束的当天早晨空腹颈部静脉采集每组试验马匹的血液10 mL于肝素钠抗凝管抗凝，静置10 min后使用离心机 （Eppendorf 5810 R） 3 500 r/min离心15 min，收集血浆，-20℃保存。
1.2.4 "样品检测
试验样本指标中丙氨酸基转移酶（ALT）、天冬氨酸基转移酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、血浆总胆固醇（CHOL）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿酸（UA）、尿素（UREA）、肌酐（CREA）、葡萄糖（GLU）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（T-BILI）、直接胆红素（D-BILI）均使用迈瑞全自动生化分析仪（BS-240Vet），生化分析仪和生化试剂盒均购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司。
1.3" 数据处理
数据使用SPSS 22.0软件统计分析，利用one-way ANOVA进行单因素方差分析，采用Duncan氏进行多重比较检验，数据用平均值±标准差（±SD）表示，Plt;0.05表示差异显著，Plt;0.01表示差异极显著。
2" 结果与分析
2.1" 不同品种孕马血浆氮、脂代谢水平的比较
研究表明，纯血马血浆总蛋白含量极显著高于其他3个品种（P＜0.01），分别比伊犁马、哈萨克马和杂交马提高了47.86%、37.61%和35.00%。4个品种孕马的血浆中白蛋白和血浆尿素氮水平之间无明显差异（P＞0.05）。血浆尿酸各品种间无显著差异（P＞0.05）。杂交马血浆肌酐浓度极显著高于伊犁马、哈萨克马和纯血马（P＜0.01），分别高231.29%、70.61%和47.86%；哈萨克马和纯血马的肌酐浓度极显著高于伊犁马（P＜0.01），分别高94.19%和124.05%。纯血马血浆甘油三酯浓度极显著高于伊犁马、哈萨克马和杂交马（P＜0.01），分别提高116.49%、356.52%和66.67%；杂交马血浆甘油三酯浓度极显著高于哈萨克马（P＜0.01），提高173.91%；伊犁马血浆甘油三酯浓度显著高于哈萨克马（P＜0.05）。杂交马血浆高密度脂蛋白浓度显著高于伊犁马和哈萨克马（P＜0.05），分别提高40.38%和37.74%；而纯血马血浆高密度脂蛋白浓度与伊犁马、哈萨克马差异不显著（P＞0.05）。纯血马血浆低密度脂蛋白浓度极显著高于杂交马（P＜0.01），提高了109.32%，显著高于伊犁马和哈萨克马（P＜0.05），分别提高44.01%和32.16%；哈萨克马低密度脂蛋白显著高于杂交马（P＜0.05），提高了58.39%。表3
2.2" 不同品种孕马肝功能代谢酶活力的比较
研究表明，哈萨克马、纯血马、杂交马血浆中的丙氨酸氨基转移酶的活力极显著高于伊犁马（P＜0.01），分别高了106.50%、115.19%和100.06%；且哈萨克马和纯血马的血浆丙氨酸氨基转移酶活力显著高于伊犁马和杂交马（P＜0.05）。4个品种孕马血浆中天冬氨酸基转移酶和碱性磷酸酶活力无显著差异（P＞0.05）。纯血马血浆中谷氨酰转肽酶显著高于伊犁马（P＜0.05），提高了25.13%。表4
2.3" 不同品种孕马血浆脂肪、糖代谢指标比较
研究表明，伊犁马、哈萨克马和纯血马血浆总胆红素水平极显著高于杂交马（P＜0.01），分别高了84.72%、140.80%和93.17%。伊犁马和哈萨克马血浆中直接胆红素水平显著高于杂交马（P＜0.05），分别高82.50%和89.83%。纯血马血浆中总胆固醇水平显著高于伊犁马和哈萨克马（P＜0.05），分别高33.11%和31.16%。伊犁马的血浆胆固醇水平极显著的高于哈萨克马、纯血马和杂交马（P＜0.01），分别高21.95%、14.75%和69.90%，且哈萨克马和纯血马的血浆胆固醇水平极显著高于杂交马（P＜0.01），分别高39.32%和48.06%。伊犁马和纯血马血浆葡萄糖浓度极显著高于哈萨克马（P＜0.01），分别高106.93%和148.18%；杂交马血浆葡萄糖浓度显著高于哈萨克马（P＜0.05），提高了83.17%。表5
3" 讨 论
3.1
为适应妊娠、分娩过程所产生的各种应激，动物机体的各个组织及器官会发生一系列适应性改变［12-14］。妊娠期随着胎儿的生长，对营养物质的需要量不断增加，母体获取营养物质的量也在增加［15］。母畜体内蛋白含量低会导致其动用体内蛋白，体重持续下降，繁殖性能降低［16］。同时，蛋白质是构成机体组织器官的主要物质，胎儿机体组织器官的快速生长发育需要大量的蛋白质［17］。胆固醇是合成性激素、VD3、肾上腺皮质激素的重要前体物质，因此妊娠期血液中的胆固醇含量可能与母体的健康水平有关系［18］。试验结果显示，纯血马血液中蛋白质和胆固醇的含量显著高于其他3个品种马，在试验条件下纯血马相较于其他3个品种马更为健康。尿素氮含量是反映动物蛋白质代谢和氨基酸平衡状况的重要指标［19］。血清中尿素氮含量下降就意味着蛋白质分解速度的降低。试验显示，纯血马血清中蛋白含量显著高于其他3个品种，而4个品种孕马之间血液中尿素氮含量并无显著差异。4个品种孕马的体内蛋白质合成、日粮中粗蛋白利用率并未出现异常。
3.2
蒲启建等［20］研究发现，不同品种牛对环境的适应能力不同，犏牛相较于西杂牛在相同环境下更容易热应激，而热应激对犏牛氨基酸代谢影响也较大，结果表现为血液中尿素氮的含量低于西杂牛。赵伟等［21］研究发现，中国小型猪血液中血糖、蛋白质和胆固醇含量的均比杜洛克猪的含量高，原因可能与中国小型猪相较于杜洛克猪灵活好动、运动量大，对饲料中营养物质的吸收高于杜洛克猪。南韦肖等［22］研究表明，不同品种鹅对粗蛋白、粗纤维和粗脂肪的消化率不同故其血液生化指标都有差异。
血浆总蛋白、白蛋白含量可反映出机体对日粮CP吸收、代谢以及氮沉积能力［23］。总蛋白的含量的提高可以说明机体向组织蛋白沉积的速率加快，从而促进组织器官的生长发育［24］。白蛋白的含量是动物机体营养状况的一种体现。Ｒeitnour等［25］研究纯血马对粗蛋白的需求量为16.60 g/kg；赵芳等［26］研究伊犁马对粗蛋白的适宜需求量为14.28 g/kg，不同品种马对蛋白质的需要量也会不同。试验结果显示，纯血马总蛋白浓度极显著高于其他3个品种，4个品种的孕马白蛋白和尿素氮水平无明显差异，4个品种的孕马在相同的饲养条件下，纯血马相较于其他3个品种孕马对日粮中蛋白质的吸收和利用率高，品种不同是导致这种差异的主要因素。
试验各品种孕马血浆肌酐、尿素氮和甘油三酯水平处于正常值范围内（与空怀期母马相比）［27］，试验日粮中CP营养水平可满足妊娠期母马的需求。血浆肌酐水平与氮利用率成反比，肌酐水平越高说明机体对氮的利用率越低［28］。试验各品种孕马血浆肌酐浓度存在显著差异，且杂交马血浆肌酐浓度极显著高于纯血马、哈萨克马和伊犁马，杂交马（健康）对氮的利用率要低于其他3个品种马。此外，方美烟等［29］研究发现在日粮中增加Ca、P水平可降低血浆肌酐浓度，但不影响妊娠后期伊犁马营养物质的消化代谢，Ca、P在调控蛋白质营养代谢方面有一定的作用。试验日粮中Ca、P含量充分，比例均衡，能够满足妊娠期各品种母马的需要，因此也是试验孕马血浆肌酐水平维持在正常范围（空怀状态母马 CREA 10.50～177.60 μmol/L）［30］内的原因。在妊娠过程中，机体为满足胎儿的需求，甘油三酯水平会出现生理性升高［31］。施琼等［32］研究发现提高妊娠初期秦川牛日粮中蛋白质水平，可升高血浆中甘油三酯浓度。试验中，纯血马甘油三酯指标极显著高于伊犁马、哈萨克马和杂交马，纯血孕马的脂代谢能力强于其他3个品种孕马。
3.3
丙氨酸氨基转移酶和谷氨酰转肽酶含量与机体肝组织是否病变有关，其含量的升高只表示肝脏受到了损害［33］。哈萨克马、纯血马和杂交马血浆中丙氨酸氨基转移酶和谷氨酰转肽酶活性均高于空怀状态下马匹正常范围（ALT：2.7～21 U/L，GGT：6～32 U/L）［34］，且哈萨克马、纯血马和杂交马的丙氨酸转移酶活性极显著高于伊犁马。虽然两种酶在不同品种马匹之间含量有所差异，但都处于正常的范围之内，是品种间的差异，对相关营养物质代谢不同所体现出这种差异。
氧化应激状态的特点主要是胆红素等内源性抗氧化物的减少和血浆中过氧化脂质的产生增加［35］。研究中伊犁马、哈萨克马和纯血马血浆中的总胆红素和直接胆红素浓度显著高于杂交马，说明妊娠生理过程对3个品种马的影响较小，而杂交马的妊娠应激更大。
妊娠期胰腺分泌胰岛素增多，胎盘会产生胰岛素酶等物质拮抗胰岛素，妊娠期间雌激素水平升高，则增加机体对葡萄糖的利用［36］。此外，温度的变化也是导致机体血糖变化的主要外因。王文涛［37］研究发现，低温环境下英国大白猪血浆葡萄糖水平高于正常环境下饲养的大白猪，与低温环境下机体能量代谢有关。不同品种动物对环境的适应能力不同。研究中纯血马血浆葡萄糖水平高于正常范围（3.41～7.37 mmol/L）［38］，一方面与品种妊娠生理有关，是胎儿的快速发育增加了对糖的需要量；另一方面可能于昭苏常年气温偏低有关［39］。纯血马的不同品种的马匹血清生化指标存在生理上的差异，与不同品种的遗传、日粮适应能力及饲养管理等有关，而具体产生差异的机制需要进一步深入研究。
4" 结 论
在相同营养水平和饲养管理条件下，因其品种差异，纯血马妊娠期与其他品种的蛋白质、肝功能酶活力及血糖水平均较为优异。而杂交马在妊娠期间肝功能代谢及血糖水平方面相较于其他3个品种较低。纯血马在总蛋白、葡萄糖、总胆固醇方面分别高于其他3个品种马25%～32%、16%～59%和15%～34%。
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Comparative study on biochemical indexes in plasma of different breeds of pregnant horse under the condition of same dietary nutrient levels
YANG Fan1， GUO Cuijie1， REN Feier1， LI Hai2， MA Yuhui2， CHEN Kaixu1
（1." College of Animal Sciences， Xinjiang Agricultural University/Xinjiang Key Laboratory of Herbivores Nutrition for Meat and Milk Production， Urumqi 830052 China; 2. Zhaosu County Xiyu Horse Industry Co.， Ltd.， Zhaosu Xinjiang 835600， China）
Abstract：【Objective】 Study the changes of blood routine biochemical indexes of pregnant mares in the later stage of pregnancy and provide reference for the healthy breeding and scientific breeding of pregnant mares.
【Methods】" 18 Ili horses， 21 Kazakh horses， 21 thoroughbred horses， 21 hybrid horses （Ili horses） with average age （7.50 ± 1.50 years）， similar parity （3-4 fetuses）， consistent fat and health status were selected for the experiment ♀×Orlovma ♂） 19 horses.The varieties were taken as the unit and they were divided into four experimental groups.Under the same dietary nutrition level and management conditions， the feeding experiment was conducted for 90 days.At the end of the trial period， the blood of pregnant horses was collected from the fasting neck vein in the morning and the relevant indexes were measured.
【Results】" （1） the total protein， triglyceride and low density lipoprotein in plasma of pure blood horses were 58.39% （P lt; 0.05）， 44.01% （P lt; 0.01） and 32.16% （P lt; 0.01） higher than those of the other three breeds， respectively.（2） The total bilirubin in plasma of Ili horse， Kazak horse and pure blood horse was significantly higher than that of hybrid horse （P lt; 0.01）， increased by 84.51%， 131.35% and 93.17%， respectively.The direct bilirubin of Ili horse and Kazak horse was higher than that of hybrid horse by 82.50% and 89.83%， respectively （P lt; 0.05）.（3） The glucose levels of Ili horse and thoroughbred horse were 106.93% and 148.18% higher than that of Kazakh horse respectively （P lt; 0.01）.
【Conclusion】 Under the same nutrition level and feeding and management conditions， due to the difference of breeds， the protein， liver function enzyme activity and blood sugar level of pure blood horses during pregnancy are superior to those of other breeds.Compared with the other three breeds， hybrid horses have defects in liver function metabolism and blood glucose level during pregnancy.
Key words：horse; pregnancy period; biochemical index; nutritional level
Fund project：The Major Science and Technology Special Project of Xinjiang Uygur Autonomous Region （2022A02013-2-3）
Correspondence author：CHEN Kaixu （1983-）， male， from Santai， Sichuan， doctor， masters supervisor， research direction： animal nutrition， （E-mail） 119889175@qq.com